| 細胞名稱: | Ect1/E6E7細胞, ATCC CRL-2614細胞, Ect1E6E7細胞, 人宮頸永生化鱗狀細胞 |
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| 細胞又名: | ECT1/E6E7; Ect1 |
| 細胞來源: | ATCC |
| 產品貨號: | CRL-2614 |
| 種屬來源: | 人 |
| 組織來源: | 外子宮頸 |
| 患者年齡: | 43 |
| 患者性別： | 女 |
| 細胞描述： |
1996年，從絕經前婦女子宮內膜異位癥子宮切除術的正常上皮組織中，建立了子宮頸外切跡1/E6E7（ATCC-CRL-2614）和宮頸內膜內End1/E6E7（ATCC-CRL-2615）細胞系。
VK2/E6E7（ATCC-CRL-2616）細胞系于1996年從絕經前婦女經陰道前后壁修復術后的正常陰道粘膜組織中建立。
用逆轉錄病毒載體LXSN-16E6E7在聚布倫存在下對第3代細胞進行永生化處理。在含G418的培養基中篩選克隆。
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| 基因表達: |
細胞角蛋白8（CK8）、10（CK10）、13（CK13）、18（CK18）和19（CK19）、巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）、轉化生長因子beta1、白細胞介素8（IL-8）、前列腺素E2、分泌性白細胞蛋白抑制劑、聚合免疫球蛋白受體、干擾素-γ和腫瘤壞死因子-α刺激或多種細胞因子、趨化因子及主要組織相容性復合物（MHC）Ⅱ類抗原表達顯著上調Cyt c-/-細胞系為缺乏細胞色素c的哺乳動物細胞提供了獨特的來源。
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| 細胞形態: | 上皮細胞樣 |
| 生長特性: | 貼壁生長 |
| 培養基: | Keratinocyte-Serum Free medium (GIBCO-BRL 17005-042) with 0.1 ng/ml human recombinant EGF, 0.05 mg/ml bovine pituitary extract, and additional calcium chloride 44.1 mg/L (final concentration 0.4 mM)。 |
| 生長條件: | 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃, |
| 傳代方法: | 1：4至1：6，每周2次。 |
| 凍存條件: | DMEM:Ham's F12 (1:1)培養基，85%；FBS，10%；DMSO，5%，液氮儲存 |
| 支原體檢測: | 陰性 |
| 安全等級: | 2 |
| 應用: |
這些細胞系可為研究宮頸陰道生理和感染以及檢測用于陰道內應用的藥物提供有效、可重復的體外模型基礎。
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| STR: |
Amelogenin X
CSF1PO 11,12
D5S818 11,12
D7S820 10
D13S317 12
D16S539 10,13
TH01 6,10
TPOX 8,11
vWA 16,17
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| 細胞說明： |
宮頸上皮細胞系具有單層柱狀上皮的特征，而宮頸外和陰道上皮細胞系具有復層鱗狀非角化上皮的特征。
在沒有刺激的情況下，三種細胞株都產生巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）、轉化生長因子beta1、白細胞介素8（IL-8）、前列腺素E2、分泌性白細胞蛋白酶抑制劑和聚合免疫球蛋白受體。
子宮內膜細胞系（End1/E6E7）也產生淋巴生成細胞因子IL-6、IL-7，以及持續檢測的稱為“活化時調節，正常T細胞表達和分泌”（RANTES）的趨化因子水平。
干擾素-γ和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）刺激可誘導或顯著上調細胞因子、趨化因子和主要組織相容性復合物（MHC）Ⅱ類抗原的表達。
淋病奈瑟菌F62株菌毛型（而非非非非菌毛型）變種主動侵入這些上皮細胞系。表達綠色熒光蛋白的淋球菌侵襲這些細胞的特點是淋球菌與F-肌動蛋白的共域化。
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| 參考文獻: |
Fichorova R.N., Rheinwald J.G., Anderson D.J.
Generation of papillomavirus-immortalized cell lines from normal human ectocervical, endocervical, and vaginal epithelium that maintain expression of tissue-specific differentiation proteins.
Biol. Reprod. 57:847-855(1997)
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Ect1/E6E7細胞ATCC CRL-2614人宮頸永生化鱗狀細胞接受后處理
1) 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請 拍照片發給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口 膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的 完全培養基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代， 傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。
5) 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現 污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
Ect1/E6E7細胞ATCC CRL-2614人宮頸永生化鱗狀細胞培養操作
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將 細胞懸液 加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清 液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血 清和 DMSO ，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲 存。記錄凍存 管位置以便下次拿取。
Ect1/E6E7細胞ATCC CRL-2614人宮頸永生化鱗狀細胞培養注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子等，確保細胞培 養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落，將細 胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證 實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確 認后我們為您再免費寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待細 胞匯合度 80% 左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以一定比例和客戶 自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和 Procell 技術 部溝通交流。由 于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問 題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
