| 產品名稱： | MGAs培養基；含有硫酸銨的基礎甘油培養基 |
|---|---|
| 英文名稱： | Minimal Glycerol with Ammonium sulfate；MGAs medium |
| 培養基類型： | 基礎培養基 |
| 級別： | AR級 |
| 品牌： | ELITE-MEDIA（艾禮培養基） |
| 產品目錄號： | M376-01、M376-02、M376-03、M376-04 |
| 產品規格： | 1L(無菌液體,500mL/瓶)、5L(無菌液體，1L/瓶)、20g（粉末）、100g（ 粉末） |
| 產品外觀： | 淺黃色至乳白色均一粉末。 |
| 顏色與澄清度： | 接近無色的透明溶液。 |
| 保存條件： | 密封，2-8°C避光保存。 |
| 注意事項： | 避免攝入、吸入、皮膚接觸。 |
| 相關產品： |
MGMa培養基 MMMa培養基 MMAs培養基 |
產品描述：
MGAs培養基(Minimal Glycerol with Ammonium sulfate) 即含有硫酸銨的基礎甘油培養基，是一種基礎培養基，與MMAs培養基、MGMa培養基、MMMa培養基一起使用，用于甲胺或（和）甲醇誘導的畢赤酵母重組蛋白表達。MGAs培養基主要用于表達前的擴增培養，而MMAs、MGMa、MMMa培養基則是誘導表達時所用的培養基。
這些培養基適用于以Zeocin為篩選標記、甲胺誘導的畢赤酵母表達系統：pFLD載體、pFLDα載體、X-33酵母、KM71H酵母、SMD1168H酵母。
配方與配制方法：
| YNB（不含硫酸銨） | 1.7 g |
| 硫酸銨 | 5.0 g |
| 生物素 | 0.4 mg |
| 甘油 | 10 g |
配制方法：
用100mL蒸餾水溶解6.7g MGAs培養基基礎，用0.2µm濾膜過濾除菌。
向800ml蒸餾水中加入100ml10%甘油水溶液（含10g甘油），然后121℃高壓蒸汽滅菌20min。
冷卻至50℃左右時，混合上述兩種溶液。
甲胺誘導的畢赤酵母蛋白表達實驗方法：
誘導表達可以使用甲醇、甲胺或者甲醇加甲胺誘導FLD1 基因的表達。以下以野生型X-33菌株為例的誘導流程如下。
1. 對于任一形式的誘導方法，均用MGAs培養基，30℃，250–300 rpm，搖床培養至OD600 達到4。
2.室溫，1500–3000×g ，離心5min，收集細胞。
然后：
• 對于以甲醇為誘導劑的，棄掉上清液，用1/5原始體積的MMAs培養基重懸菌體沉淀。
• 對于以甲胺為誘導劑的，棄掉上清液，用1/5原始體積的MGMa培養基重懸菌體沉淀。
• 對于以甲胺和甲醇為誘導劑的，棄掉上清液，用1/5原始體積的MMMa培養基重懸菌體沉淀。
3. 30℃培養5天。對于含有甲醇或者甲醇和甲胺的培養基，每隔24h加入終濃度0.5%的100%甲醇以保持誘導。
時間點:
0, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h
在下面給出的時間點，轉移1mL菌液到1.5mLEP管中，用桌面離心機的最高轉速，室溫條件下，離心2-3min。這些樣品將用于分析表達水平，以確定誘導后的最佳收獲時間。