| 產品名稱： | M9基礎培養基（含補充劑）；M9培養基 |
|---|---|
| 英文名稱： | M9 SeMET High-Yield Growth Medium |
| 培養基類型： | 合成培養基 |
| 級別： | for microbiology |
| 品牌： | ELITE-MEDIA（艾禮培養基） |
| 產品目錄號： | M181-01、M181-02 |
| 產品規格： | 250g、500g |
| 產品外觀： | 白色均一粉末。 |
| 滅菌后顏色與澄清度： | 無色至淡黃色透明溶液。 |
| 保存條件： | 密封，2-25°C保存。制備好的培養基2-8°C避光保存。 |
| 注意事項： | 避免攝入、吸入、皮膚接觸。 |
| 相關產品： |
M9 Minimal Medium（M9基礎培養基） 5X M9 Salts |
產品描述：
M9基礎培養基(M9 Minimal Medium)是一種合成培養基，是分子生物學和蛋白結構研究中常用的大腸桿菌培養基。含補充劑的M9基礎培養基用于大腸桿菌表達硒代甲硫氨酸標記的蛋白質(Seleno-Methionine labeled protein)，或者N15標記的蛋白質，以制備蛋白晶體。本配方中含有維生素和礦物質，可以促進細菌生長；適合非氨基酸缺陷型大腸桿菌，對于營養缺陷型大腸桿菌菌株，需要添加對應成分到培養基中。
配方與配制方法
| 組分 | g/L |
| 葡萄糖 | 4 |
| MgSO4 | 0.24 |
| CaCl2 | 0.011 |
| Na2HPO4 | 6.78 |
| KH2PO4 | 3 |
| NaCl | 0.5 |
| NH4Cl | 1.0 |
| 維生素B1 | 0.001 |
| 生物素 | 0.001 |
| EDTA | 0.05 |
| FeCl3 x 6 H2O | 0.0083 |
| ZnCl2 | 0.00084 |
| CuCl2 x 2 H2O | 0.00013 |
| CoCl2 x 6 H2O | 0.0001 |
| H3BO3 | 0.0001 |
| MnCl2 x 6 H2O | 0.000016 |
| Na2MoO4•H2O | 0.0003 |
稱取本產品21.63g，加入1000ml去離子水重懸。
加熱攪拌至完全溶解。有輕微沉淀為正常現象，不影響使用。培養過程中不溶性沉淀會消失。
也可以從頭配制，按照以下方法
| 組分 | g/L |
| 5x M9 salts | 200 ml |
| 20%葡萄糖 | 20 ml |
| 1M MgSO4 | 2 ml |
| 1M CaCl2 | 0.1 ml |
| 1000x微量元素 | 1 ml |
| 1000x維生素 | 1 ml |
5x M9 salts
| 組分 | g/L |
| Na2HPO4-7H2O | 64 |
| KH2PO4 | 15 |
| NaCl | 2.5 |
| NH4Cl | 5.0 |
| pH 7.2+/-0.2 |
實驗方法：
SeMet是有毒的。培養基上清液應該集中起來當做有害物質處理。廢液瓶中液面到肩處，不要到瓶口處。標記好有害物標簽。參考實驗室標準操作流程，正確使用SeMet。最低安全措施，操作人員需要合適的個人防護裝置，包括丁腈橡膠手套、實驗服、全覆蓋的鞋。接種：
早晨，將甘油菌或單克隆接種到2-5ml LB培養基中，培養至下午4、5點鐘。
離心菌液，丟棄上清液，收集菌體細胞。
將菌體接種到50ml或100ml M9基礎培養基中，37ºC過夜培養。提前一天將M9基礎培養基過夜預熱和預通氣，能夠極大的加快起始生長速度。
接種過夜培養物
取20ml過夜培養的菌液接種到1L M9基礎培養基中，37ºC培養。
直到DO600值達到0.5~0.6。一般來說需要大約10h。
加入氨基酸混合物，以抑制甲硫氨酸合成，提供硒代甲硫氨酸合成用底物。再繼續培養15min。
誘導、表達、收集
接下來的流程與普通蛋白表達流程相同。例如以25ºC作為表達溫度。
在加入混合氨基酸15min后，將溫度降至25ºC。
10min后加入IPTG ，工作濃度為1 mM/L。
過夜表達（一般為16-18h）。