| 產品名稱: | PEIMax轉染試劑、PEI Max轉染試劑，PEIMax MW40000、PEI Max MW40000，PEIMax 40K、PEI Max 40K，Polyethylenimine、線性聚乙烯亞胺、線性PEI、轉染級別PEI |
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| 英文名稱: |
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) (Polysciences#24765-1 1g; Polysciences#24765-100 100mg) PEIMAX 24765 PEI Max 24765 |
| 規格: | 100mg，1 g, 1 ml， |
| 產品目錄號: |
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) 100mg Polyscience#24765-100 PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) 1g Polyscience#24765-1 MaxFect Transfection Regent 1ml Biofeng# A609 |
| 貯存條件: | 避光，-20度 |
| CAS號: |
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) CAS Number: 49553-93-7 MaxFect Transfection Regent CAS Number: 49553-93-7 |
| 物理性狀: | 固體為白色或近白色粉末。 1 mg/mL水溶液透明，接近無色或略顯黃色。 |
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用途: |
細胞培養級別的質粒轉染。本產品僅供科研使用，不能用于臨床治療。 |
| PEI MW25000和PEI Max MW40000區別： |
PEI MAX MW40000 ( Polysciences#24765-1)是線性化聚乙烯亞胺PEI MW25000(Polysciences#23966-1)的升級產品，是一種功能更為強大的高效瞬時轉染試劑。PEI MAX MW40000與PEI 25000的區別在于： 1）完全水解（去乙酰化） 2）PEI 25000的鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性 3）含更長連續性乙烯亞胺片段，其轉染效率比PEI MW25000提高11%以上。
4）PEI MAX 40K比PEI 25K更易于使用，并且更高效。PEI 25K轉染溶液通常需要幾個小時才能制備，而PEI MAX 40K可以在兩個小時內轉化為即用型可溶性溶液。
5）PEI 25K含有4-11%的殘余丙酰基，可防止聚合物主鏈與DNA強烈結合。PEI MAX 40K完全去乙酰化的結構意味著每批產品的表現始終如一，穩定性更強。 |
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儲存濃度: |
1 mg/ml |
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工作濃度: |
3 ug/ml 左右，每ml培養基加入3 ul儲存液。 |
| PEI轉染試劑配置方法： |
1. 稱取100mg PEI轉染試劑，溶解于100ml無菌水中。配置的終濃度是1 mg/ml. 2. 緩慢使用稀鹽酸，調節PH至7.0，一定不要讓pH過了，一旦過了效果就不好了。 3. 使用0.1um或者0.22um無菌過濾器，過濾除菌。 4. 分裝成每管500ul-1ml，-20度，保存，備用。 5. 使用超純水配置，器具一定要滅菌干凈，防止支原體污染。 |
| 適用范圍: |
本產品適用于絕大多數真核細胞質粒轉染：HEK 293，293T，A549，B16F10，HeLa，Hepa 1-6，Hepa-1c1c7，HepG2，BHK-21，C2C12，C6，CHO-K1，COS-1，COS-7，Daoy，DU 145，K562，KB，LL/2(LLC1)， LNCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR-3，PC-3，PC-12等。 |
| 細胞培養基: |
PEI轉染試劑適用于大多數常用細胞培養基，且轉染前后不需要更換培養基，血清的存在不影響轉染效率。 |
| 轉染時細胞密度： |
一般來說，當細胞密度達到60% - 80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率。然而，不同細胞的最適轉染密度都不盡相同。因此在初次轉染某種細胞時，可以通過預實驗先確認該細胞最佳的轉染密度。 |
| 轉染質粒純度和濃度： |
用于細胞轉染的DNA應具有較高的純度，且無內毒素殘留(推薦使用無內毒素質粒大提試劑盒進行質粒抽提)。質粒濃度盡量高一些，建議大于500 ng/ul. |
| 轉染比例： |
DNA：PEI = 1:3 1ml細胞培養液，建議使用1 ug-3 ug DNA 和3 ul - 9 ul PEI轉染試劑儲存液。具體根據細胞情況自由調整。
在初次轉染某種細胞時，推薦PEI和DNA的比例為2:1，即1 μg DNA使用2 μl PEI。轉染1 μg DNA所使用的PEI轉染試劑劑量可以在1 - 5 μl之間進行調整以獲得最佳的轉染效率。
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| 轉染后細胞培養時間: |
對于絕大多數細胞實驗而言培養24 - 48 h即可，如實驗情況特殊可在12 - 72 h之間進行優化。
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| 細胞轉染步驟： |
以6孔板細胞培養轉染為例: 使用細胞培養液3ml，DNA質粒3ug，PEI轉染試劑9ug。可以根據不同細胞特性，增加DNA和PEI使用量。 細胞培養
1. 轉染前24 h左右對細胞進行傳代，接種密度約為1 - 3 × 105 cells/well。細胞接種密度，大約在60%左右。
2. 過夜培養。
3. 吸出培養液，使用新鮮培養液清洗3-4次。然后，加入2.7 ml新鮮配置的完全培養基。因為細胞過夜生長的分泌物有可能影響轉染效率，所有建議進行細胞清洗操作。更換新鮮培養液，有助于轉染后的細胞表達和生長，防止細胞營養的不足。 也可以不吸出培養液，不更換新鮮培養液，直接進行細胞轉染。 4. 當細胞匯合度達到60% - 80%時，轉染可以取得較高的轉染效率。 PEI/DNA復合物配置 1. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養基，并加入3 ug DNA質粒，用移液器輕輕混勻。
2. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養基，并加入9 ug PEI轉染試劑儲存液，用移液器輕輕混勻。
3. 將PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中，用移液器輕輕混勻，室溫靜置15 - 30 min后可用于轉染。注意：形成的PEI/DNA復合物溶液盡量在30 min內使用。
4. PEI/DNA復合物的形成，一定是分別在無血清培養基中稀釋后，再進行混勻。血清的存在會干擾復合物的形成。 細胞轉染 1. 將PEI/DNA復合物混合液滴加至6孔板培養基中，輕輕晃動吹打培養液使PEI/DNA復合物均勻分散。 2. 過夜培養24-72小時。 |
| 初始轉染條件： |
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| PEI轉染效率： |
細胞種類 中文名稱 PEI 轉染效率 HEK293 人胚腎細胞 90%-95% 293-T 人胚腎細胞 90%-95% CHO-K1 倉鼠卵巢細胞 80%-90% U251 人源神經膠質瘤細胞 80%-90% Hela 人源宮頸癌細胞 70%-80% COS7 猴 SV40 轉化腎細胞 70%-80% HepG2 人源肝癌細胞 70%-80% NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細胞 60%-70% 膠質瘤干細胞 人源膠質瘤干細胞 60%-70% Patu8988 人源胰腺癌細胞 60%-70% U2OS 人源骨肉瘤細胞 60%-70% |
| 產品圖片： |
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™) (Polyscience#23966-1 1g) PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) (Polyscience#24765-1 1g)   |
| 相關產品: |
PEI轉染試劑 PEI MW25000轉染試劑 Polysciences試劑進口代理 |
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參考文獻和操作文檔： |
PEI MW25000轉染試劑使用方法 PEI MAX轉染貼壁和懸浮細胞方法 PEI MW25000(Polyscience#23966)轉染試劑配置方法 PEI MW25000轉染試劑配置方法2 PEI MAX MW4000轉染試劑配置和使用方法 PEI質粒轉染細胞方案 PEI質粒轉染293T細胞實驗方案 PEI轉染懸浮細胞293F操作方法 PEI MAX轉染質粒Expi293懸浮細胞實驗方案 PEI 轉染質粒AAV腺病毒擴增案例 PEI轉染質粒慢病毒擴增案例 PEI轉染質粒擴增第三代慢病毒方案 PEI轉染質粒擴增逆病毒方案 PEI轉染質粒擴增狂犬病EIAV病毒實驗方案 |
PEI轉染試劑質粒轉染效果圖
PEI轉染細胞常見問題與解決方案
. 轉染效率偏低
1. PEI與DNA的比例不合適
通過預實驗優化ExFect與DNA的最佳比例：在ExFect 1 - 5 μl/μg DNA范圍內嘗試，優化DNA的使用量：以24孔板為例，在0.5 - 2 μg/孔范圍內優化(具體可參見表一)。在后續的實驗中選擇轉染效率高、細胞毒性低的比例進行轉染。
通過預實驗優化ExFect與DNA的最佳比例：在ExFect 1 - 5 μl/μg DNA范圍內嘗試，優化DNA的使用量：以24孔板為例，在0.5 - 2 μg/孔范圍內優化(具體可參見表一)。在后續的實驗中選擇轉染效率高、細胞毒性低的比例進行轉染。
2.PEI原液或/和DNA原液未經無血清培養基稀釋直接混合
PEI和DNA需分別在無血清培養基條件下按一定比例稀釋后再進行混合孵育。
3. 轉染時細胞密度不合適
多數情況下，當細胞匯合度達到60% - 80%時，轉染可以取得較高的轉染效率。然而細胞類型不同，最適的轉染密度也不盡相同。可以通過預實驗優化細胞轉染密度。
4.DNA質量偏低(降解或內毒素)
為實現高效率、低毒性的轉染，應使用高純度、無菌、無內毒素的質粒DNA。
5.PEI/DNA復合物形成的反應體系中包含血清
當ExFect/DNA復合物形成反應體系中存在血清時，ExFect/DNA復合物無法正常形成。
6.轉染體系中存在轉染抑制因素
當轉染體系中存在多聚陰離子聚合物時(例如：硫酸葡聚糖、肝素等)，轉染將無法正常進行。因此應避免上述物質存在于細胞轉染體系中。
7.細胞狀態偏差
傳代次數太少或者太多都將導致細胞轉染效率的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性，應盡量使用適度傳代的細胞系，并盡量在平行實驗時保持細胞傳代次數的一致性。另外，支原體的感染或爆發會影響細胞的轉染效率。建議使用支原體檢測和/或清除試劑盒處理。
. 轉染后細胞狀態差
1.轉染后細胞培養時間過長
多數情況下，在完全培養基中進行轉染，24 h內無需換液處理，但是培養時間過長可能會導致細胞狀態較差，建議根據實驗需要合理安排后續實驗時間。
2.轉染時細胞密度不合適
多數情況下，當細胞匯合度達到60% - 80%時轉染可以取得較高的轉染效率。細胞密度過低導致細胞生長緩慢，對外來刺激變得較為敏感，使得轉染毒性增高。細胞密度過高，會導致細胞發生接觸抑制，加快細胞凋亡。
3.PEI/DNA過量
轉染試劑過量會導致較高的細胞毒性。嘗試降低轉染試劑的使用比例或者減少DNA用量，具體比例參見表一。
4.PEI/DNA復合物加入培養基時分布不均勻
局部ExFect/DNA復合物濃度過高是導致細胞毒性偏高的最常見的原因之一。當PEI/DNA添加到細胞培養孔/皿之后，應即刻輕輕搖動培養板/皿，使之完全混勻。
5.細胞狀態偏差
傳代次數太少細胞狀態未恢復，或者傳代次數太多細胞老化，都將由于細胞生長狀態不適而導致轉染試劑毒性增加。因此應盡量使用適度傳代的細胞，降低細胞代次差異對實驗結果造成的影響。