| 出品公司: | Takara |
|---|---|
| 載體名稱: | pCold II, pColdII, pCold-II |
| 質粒類型: | 大腸桿菌蛋白表達載體 |
| 表達水平: | 高 |
| 啟動子: | CSPA |
| 克隆方法: | 多克隆位點，限制性內切酶 |
| 載體大小: | 4392 bp |
| 5' 測序引物及序列: | pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3' |
| 3' 測序引物及序列: | pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3' |
| 載體標簽: | N-His, |
| 載體抗性: | Ampicillin 氨芐 |
| 備注: |
溫度誘導，冷休克蛋白表達載體
|
| 產品目錄號: | 3362 |
| 穩定性: | 瞬時表達 Transient |
| 組成型: | 誘導表達 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
買家導航
pCold II載體 pColdII質粒基本信息
pCold II質粒圖譜 pColdII載體圖譜和pCold II載體序列 pColdII質粒序列多克隆位點信息
pCold II質粒 pColdII載體簡介
闡明蛋白質的結構和功能是后基因組研究的一個重要課題。高效率的蛋白質表達系統是研究這些課題的不可缺少的基本技術。大腸桿菌作為宿主的表達系統中被廣泛 使用于生產重組蛋白。大腸桿菌表達系統具有良好的優勢,方法簡單，成本低。然而，對于某些基因，蛋白表達很困難，表達的蛋白質不溶。
為了解決這些問題，TAKARA與Masayori Inouye教授（美國新澤西醫學和牙科大學）進行聯合研究，以制定一個高效基于低溫冷休克蛋白基因的大腸桿菌表達載體。pCold DNA系列產品具有上述的優點，并提供了一個重要功能和結構的分析以及其他蛋白質研究領域的工具。
<產品概況和特點>
當培養的大腸桿菌的溫度充分降低，幾乎暫時停止生長大部分的蛋白表達減少，而此時一組蛋白質稱為“冷休克蛋白”被專門誘導表達。
冷休克表達載體，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA啟動子設計高效率蛋白質表達載體。 CSPA的啟動子的下游處，插入了lac操縱子，以便嚴格控制表達。此外，5'非翻譯區（5'UTR），翻譯增強元件（TEE），His標簽序列，Xa因 子切割位點和多克隆位點（MCS）位于在CSPA啟動子的下游的。由于該產品采用了大腸桿菌的啟動子，大多數大腸桿菌菌株可被用作表達宿主。有四種類型的 pCold載體，他們的下列原件的位置稍有不同，TEE，His標簽序列和Factor XA酶切位點。
pCold II質粒序列 pColdII載體序列
LOCUS pCold\II 4392 bp DNA circular SYN 10-AUG-2004
DEFINITION Expression vector pColdII DNA, complete sequence.
ACCESSION AB186389
VERSION AB186389.1 GI:51090250
KEYWORDS .
SOURCE Expression vector pColdII
ORGANISM Expression vector pColdII
other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
//gt12365.cn/
COMMENT VNTAUTHORNAME|gt12365.cn|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4392
/organism="Expression vector pColdII"
/mol_type="other DNA"
/db_xref="taxon:289230"
/lab_host="Escherichia coli"
/note="expresses an open reading frame as a fusion to a
His6 containing translation enhancing element. This
plasmid is derived from pUC118."
gene 15..497
/gene="cspA"
promoter 15..81
/gene="cspA"
misc_feature 82..121
/gene="cspA"
/note="synthetic lac operator sequence"
5'UTR 122..255
/gene="cspA"
/note="modified cspA 5'UTR"
misc_feature 256..270
/gene="cspA"
/note="TEE (translation enhancing element)"
misc_feature 271..288
/gene="cspA"
/note="His6 tag"
misc_feature 286..345
/gene="cspA"
/note="MCS = Multiple cloning sites contain the follow
restriction sites: NdeI, SacI, KpnI, XhoI, BamHI, EcoRI,
HindIII, SalI, PstI, XbaI"
3'UTR 353..497
/gene="cspA"
/note="cspA 3'UTR"
misc_feature complement(696..1169)
/note="M13 intergenic region"
gene 1356..2216
/gene="Amp"
CDS 1356..2216
/gene="Amp"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="beta-lactamase"
/protein_id="BAD35136.1"
/db_xref="GI:51090251"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW"
rep_origin 2376..2990
/note="ColE1 origin"
gene complement(3147..4229)
/gene="lacI"
CDS complement(3147..4229)
/gene="lacI"
/codon_start=1
/transl_table=11
/product="lactose operon repressor"
/protein_id="BAD35137.1"
/db_xref="GI:51090252"
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAE
LNYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERS
GVEACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSII
FSHEDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREG
DWSAMSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDT
EDSSCYIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNT
QTASPRALADSLMQLARQVSRLESGQ"
ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat ggagctcggt
301 accctcgagg gatccgaatt caagcttgtc gacctgcagt ctagataggt aatctctgct
361 taaaagcaca gaatctaaga tccctgccat ttggcgggga tttttttatt tgttttcagg
421 aaataaataa tcgatcgcgt aataaaatct attattattt ttgtgaagaa taaatttggg
481 tgcaatgaga atgcgcaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct
541 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag
601 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc
661 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccataaaatt gtaaacgtta atattttgtt
721 aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg
781 caaaatccct tataaatcaa aagaatagcc cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg
841 gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta
901 tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc acccaaatca agttttttgg ggtcgaggtg
961 ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa
1021 gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct
1081 ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct
1141 acagggcgcg tactatggtt gctttgacgt atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta
1201 aggagaaaat accgcatcag gcgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc
1261 ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct
1321 gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg
1381 cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg
1441 tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc
1501 tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca atgatgagca
1561 cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat tgacgccggg caagagcaac
1621 tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca gtcacagaaa
1681 agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata accatgagtg
1741 ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt
1801 ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg
1861 aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt agcaatggca acaacgttgc
1921 gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta atagactgga
1981 tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta
2041 ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc
2101 cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg
2161 atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt
2221 cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa
2281 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt
2341 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt
2401 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt
2461 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga
2521 taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag
2581 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata
2641 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg
2701 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga
2761 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca
2821 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa
2881 acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt
2941 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac
3001 ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatagtcat gccccgcgcc caccggaagg
3061 agctgactgg gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgaga tcccggtgcc taatgagtga
3121 gctaacttac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt
3181 gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgcc
3241 agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt caccgcctgg
3301 ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg aaaatcctgt
3361 ttgatggtgg ttaacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc gtatcccact
3421 accgagatat ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat tgcgcccagc
3481 gccatctgat cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt cagcatttgc
3541 atggtttgtt gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc tatcggctga
3601 atttgattgc gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc cgagacagaa
3661 cttaatgggc ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag atgctccacg
3721 cccagtcgcg taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt ctggtcagag
3781 acatcaagaa ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat ggcatcctgg
3841 tcatccagcg gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag attgtgcacc
3901 gccgctttac aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac gctggcaccc
3961 agttgatcgg cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg cagggccaga
4021 ctggaggtgg caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg tgccacgcgg
4081 ttgggaatgt aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt tttcgcagaa
4141 acgtggctgg cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc ggcatactct
4201 gcgacatcgt ataacgttac tggtttcaca ttcaccaccc tgaattgact ctcttccggg
4261 cgctatcatg ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga tggtgtccgg gatctcgacg
4321 ctctccctta tgcgactcct gcattaggaa gcagcccagt agtaggttga ggccgttgag
4381 caccgccgcc gc
//